大鼠成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)ELISA试剂盒实验说明如下: 实验原理 ELISA(酶联免疫吸附试验)通过特异性抗体捕获目标蛋白(FGFR1),结合酶标记的二抗和底物显色反应,实现定量检测。FGFR1作为受体酪氨酸激酶家族成员,其检测需注意抗体对跨膜区或胞外结构域的特异性结合。 试剂准备 标准品配制:需将FGFR1标准品按梯度稀释(如2.4-0.15 IU/mL范围),建议使用含0.1% BSA的PBS缓冲液以减少非特异性结合。 抗体选择:推荐使用抗大鼠FGFR1单克隆抗体(如Cell Signaling Technology产品)作为捕获抗体,多克隆抗体作为检测抗体。 封闭液:常用5%脱脂奶粉或3% BSA封闭未结合位点,室温孵育1小时。 操作步骤 样本处理:组织样本(如肾组织)需裂解后离心取上清,BCA法测定蛋白浓度,建议稀释至1-10 μg/mL范围。 包板与孵育: 抗体包被(4℃过夜)后,37℃孵育样本1小时; 加入生物素标记二抗,37℃孵育30分钟; 加入HRP标记链霉亲和素,显色前避光孵育15分钟。 显色与终止:TMB底物显色3-5分钟后,用2M硫酸终止反应,酶标仪读取450nm吸光度。 Elisa实验操作步骤流程: 实验前准备 第一步:配置缓冲液和洗液 第二步:样本活化 第三步:标准品溶解和稀释 第四步:包被抗体 第五步:洗涤 第六步:显色反应 第七步:结果检测 数据分析 标准曲线:以标准品浓度对数为横坐标,OD值为纵坐标,拟合四参数逻辑曲线(R²需>0.99)。 灵敏度:单克隆抗体ELISA检测下限可达0.15 IU/mL,多克隆抗体为18.9 IU/mL。 注意事项 交叉反应:需验证抗体对大鼠FGFR1的特异性,避免与其他FGFR亚型(如FGFR2)交叉反应。 样本保存:组织裂解液需分装后-80℃保存,避免反复冻融。 注:以上仅供参考,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒 天津天正信达供应:RNA逆转录试剂盒、逆转录试剂盒、PCR试剂盒 、提取试剂盒、色谱进样瓶、培养基瓶、试剂瓶、胎牛血清、染色液、试剂瓶、QPCR试剂盒、生物试剂、抗体、琼脂糖、实验耗材,开云在线登录拥有一支覆盖生物化学、分子生物学、免疫学等专业人员的研发、构建了仪器设备齐全的实验技术平台,主要包括AKTA、高压均质机、全波长酶标仪、高速落地离心机和qPCR仪等大型仪器设备。 |