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大鼠成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)ELISA试剂盒实验说明

发表时间:2025/10/14  |  点击率:56
 
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  大鼠成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)ELISA试剂盒实验说明如下:

  实验原理

  ELISA(酶联免疫吸附试验)通过特异性抗体捕获目标蛋白(FGFR1),结合酶标记的二抗和底物显色反应,实现定量检测。FGFR1作为受体酪氨酸激酶家族成员,其检测需注意抗体对跨膜区或胞外结构域的特异性结合‌。

  试剂准备

  标准品配制‌:需将FGFR1标准品按梯度稀释(如2.4-0.15 IU/mL范围),建议使用含0.1% BSA的PBS缓冲液以减少非特异性结合。

  抗体选择‌:推荐使用抗大鼠FGFR1单克隆抗体(如Cell Signaling Technology产品)作为捕获抗体,多克隆抗体作为检测抗体。

  封闭液‌:常用5%脱脂奶粉或3% BSA封闭未结合位点,室温孵育1小时。

  操作步骤

  样本处理‌:组织样本(如肾组织)需裂解后离心取上清,BCA法测定蛋白浓度,建议稀释至1-10 μg/mL范围。

  包板与孵育‌:

  抗体包被(4℃过夜)后,37℃孵育样本1小时;

  加入生物素标记二抗,37℃孵育30分钟;

  加入HRP标记链霉亲和素,显色前避光孵育15分钟。

  显色与终止‌:TMB底物显色3-5分钟后,用2M硫酸终止反应,酶标仪读取450nm吸光度。

  Elisa实验操作步骤流程:

  实验前准备

  第一步:配置缓冲液和洗液

  第二步:样本活化

  第三步:标准品溶解和稀释

  第四步:包被抗体

  第五步:洗涤

  第六步:显色反应

  第七步:结果检测

  数据分析

  标准曲线‌:以标准品浓度对数为横坐标,OD值为纵坐标,拟合四参数逻辑曲线(R²需>0.99)。

  灵敏度‌:单克隆抗体ELISA检测下限可达0.15 IU/mL,多克隆抗体为18.9 IU/mL。

  注意事项

  交叉反应‌:需验证抗体对大鼠FGFR1的特异性,避免与其他FGFR亚型(如FGFR2)交叉反应。

  样本保存‌:组织裂解液需分装后-80℃保存,避免反复冻融。

  注:以上仅供参考,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒

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