大鼠Ki-67蛋白(Ki67P)ELISA试剂盒实验原理 大鼠Ki-67蛋白(Ki67P)ELISA试剂盒的实验原理主要基于双抗体夹心法,通过特异性抗体捕获目标蛋白并显色定量。以下是详细解析: 一、核心检测原理 抗体包被 试剂盒预包被抗Ki-67蛋白的单克隆抗体于酶标板微孔中,形成固相捕获层。 抗原-抗体结合 样本或标准品中的Ki-67蛋白与包被抗体特异性结合,形成“抗体-抗原"复合物。 信号放大 加入生物素标记的二抗(抗Ki-67多克隆抗体),与已结合的抗原形成“抗体-抗原-二抗"复合物。 通过链霉亲和素-生物素-过氧化物酶(SA-ABC)系统进一步放大信号。 显色与定量 加入TMB显色底物后,酶催化反应生成蓝色产物,终止液变黄,在450nm波长下检测吸光度(OD值),Ki-67浓度与OD值呈正比。 二、关键组分与流程 试剂盒组分:包被抗体、生物素化二抗、SA-ABC复合物、TMB底物、终止液等。 操作步骤: 样本稀释与加样 37℃孵育(通常1小时) 洗涤去除未结合物质 加入二抗与SA-ABC复合物 显色反应后终止并读数 三、技术特点 高特异性:双抗体夹心法可减少交叉反应,提高检测准确性。 灵敏度:检测范围通常为0.312-20ng/mL,适用于低丰度蛋白检测。 标准化:需通过标准曲线计算样本浓度,确保结果可比性。 四、注意事项 样本处理:避免反复冻融,建议使用新鲜组织或血清样本。 干扰因素:高浓度内源性生物素或异嗜性抗体可能影响结果,需通过稀释或阻断剂处理。 如需进一步了解Ki-67的生物学功能或临床意义,可参考免疫组化检测的相关研究。 注:仅供科研使用,以上资料供参考,如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。 天津天正信达供应:RNA逆转录试剂盒、逆转录试剂盒、PCR试剂盒 、提取试剂盒、色谱进样瓶、培养基瓶、试剂瓶、胎牛血清、染色液、试剂瓶、QPCR试剂盒、生物试剂、抗体、琼脂糖、实验耗材,开云在线登录拥有一支覆盖生物化学、分子生物学、免疫学等专业人员的研发、构建了仪器设备齐全的实验技术平台,主要包括AKTA、高压均质机、全波长酶标仪、高速落地离心机和qPCR仪等大型仪器设备。 |