能详细说说酶联免疫吸附法的步骤吗?

　　能详细说说酶联免疫吸附法的步骤吗?

　　酶联免疫吸附法(ELISA)是一种常用的免疫学检测技术，其核心步骤包括样本处理、加样、温育、洗涤、显色和结果测定等环节‌。以下是基于常见双抗体夹心法的详细操作流程：

　　1. ‌试剂准备与样本处理‌

　　标准品溶解‌：将冻干标准品加入1mL通用稀释液，静置15分钟溶解后，按说明书进行倍比稀释，配置梯度浓度工作液‌。

　　样本稀释‌：根据样本类型(如血清、细胞上清)进行适当稀释(如10倍稀释：取20μL样本加180μL稀释液)‌。

　　2. ‌加样与温育‌

　　加样‌：从平衡至室温的铝箔袋中取出酶标板，每孔加入100μL标准品或稀释后的样本，空白孔加稀释液‌。

　　初次温育‌：盖上封板膜，37℃孵育60-90分钟，使抗原与固相抗体结合‌。

　　3. ‌洗涤与检测‌

　　洗涤‌：弃去液体后，每孔加入300μL洗涤液，静置1分钟，重复洗涤3-5次以去除未结合物质‌。

　　加检测抗体‌：每孔加入100μL生物素化检测抗体，37℃孵育60分钟‌。

　　加酶结合物‌：洗涤后加入酶结合物(如ABC工作液)，37℃反应30分钟‌。

　　4. ‌显色与结果测定‌

　　显色‌：每孔加入90μL TMB底物，37℃避光反应15分钟‌。

　　终止与读数‌：加入50-100μL终止液终止反应，立即用酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值)‌。

　　关键注意事项

　　样本保存‌：血液样本需分离血清，2-8℃保存不超过7日，长期保存需-20℃以下。

　　温育控制‌：建议采用水浴或湿盒孵育，确保温度均匀。

　　洗涤质量‌：洗涤需津，避免残留液体影响结果。

　　ELISA的灵敏度可达ng/mL~pg/mL水平，广泛用于抗原、抗体及小分子检测‌。不同方法(如间接法、竞争法)步骤略有差异，需根据实验目的调整‌。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

　　天津天正信达供应：RNA逆转录试剂盒、逆转录试剂盒、PCR试剂盒 、提取试剂盒、色谱进样瓶、培养基瓶、试剂瓶、胎牛血清、染色液、试剂瓶、QPCR试剂盒、生物试剂、抗体、琼脂糖、实验耗材，开云在线登录拥有一支覆盖生物化学、分子生物学、免疫学等专业人员的研发、构建了仪器设备齐全的实验技术平台，主要包括AKTA、高压均质机、全波长酶标仪、高速落地离心机和qPCR仪等大型仪器设备。