ELISA实验必看:规范品溶解与稀释的操作步骤
以下是ELISA实验中标准品溶解与稀释的规范操作步骤,综合多个可靠来源整理而成:
1. 标准品准备
平衡试剂:将标准品和稀释液取出后,室温平衡30分钟。
核对试剂:按说明书确认标准品浓度、稀释液体积及所需孔位。
2. 标准品复溶与稀释
初次复溶:
取1管冻干标准品,加入500 μL标准品稀释液(或说明书指定体积)。
静置1–2分钟,轻轻混匀后800g离心1分钟,确保液体沉至管底。
梯度稀释:
准备6–7支离心管(标记S1–S7或浓度梯度),每管加入200 μL稀释液。
从S1管取150 μL至S2管混匀,依次倍比稀释至S6管,S7管作为空白对照。
注意:部分试剂盒要求最终稀释液浓度需覆盖检测范围(如0.15–10 ng/mL)。
3. 加样与孵育
酶标板操作:
每孔加入50 μL稀释后的标准品(建议双孔平行)。
加入样本或检测抗体后,封板37℃孵育30–60分钟。
注意事项
混匀方式:避免剧烈震荡,推荐涡旋或移液枪吹打。
时效性:显色后需在15分钟内终止并读取OD值。
注:以上资料仅供参考,如需进一步了解产品详情,可参考品牌供应商或技术老师。
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