大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒实验使用说明书 BS-3008 大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒 以下是大鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒的实验使用说明书综合整理： 一、实验原理 采用双抗体夹心法或固相夹心法ELISA技术。通过包被抗体捕获样本中的TNF-β，再与酶标抗体形成复合物，经TMB显色后，颜色深浅与TNF-β浓度成正比。 二、试剂盒组成 核心组分： 预包被微孔板(96孔) 标准品(浓度梯度：15.6~1000 pg/mL，冻干品需复溶) 酶标抗体(HRP标记) 显色底物(TMB A/B) 终止液(2N H₂SO₄) 浓缩洗涤液(20×~30×) 需自备器材： 酶标仪(450nm)、移液器(10~1000μL) 37℃恒温箱、离心机(2000~5000×g) 三、样本处理 血清/血浆：全血室温静置2小时后离心(1000×g，20分钟)，避免溶血或脂血。 组织匀浆：按1:9(重量:体积)加入PBS匀浆，离心取上清。 保存：短期存于4℃，长期需分装冻存于-20℃(避免反复冻融)。 四、操作步骤 试剂准备： 复温：所有试剂室温平衡30分钟。 稀释洗涤液(如20×→1×)。 标准品稀释： 按说明书梯度稀释(如1000→500→250 pg/mL)。 加样与温育： 加标准品/样本(100μL/孔)，37℃孵育90分钟。 洗涤3次(每孔加洗涤液静置1分钟后甩干)。 显色与检测： 加TMB底物(90μL/孔)，避光反应15分钟→终止液(50μL/孔)。 酶标仪读取OD450nm值。 五、注意事项 关键控制点： 移液精度误差≤2%，避免气泡干扰。 显色液需避光现配，终止液倾倒缓慢防溅。 数据计算： 以标准曲线拟合样本浓度(推荐四参数逻辑曲线)。 保存条件： 未开封试剂盒：2-8℃保存6个月;开封后板条需密封防潮。 六、常见问题 显色异常：检查底物是否过期或污染。 高背景值：洗涤不或样本浓度过高(需稀释)。 注：以上资料仅供参考，如需具体品牌试剂盒的完整说明，可咨询技术老师或品牌供应商的详细文档。 | 
