elisa实验：样本采集和保存问题

　　elisa实验：样本采集和保存问题

　　一、不同类型样本的采集要点

　　血清样本‌：静脉采血后室温静置1小时，4℃下2500rpm离心10分钟取上清，全程避免溶血，红细胞释放的过氧化物酶会造成非特异性显色，干扰HRP标记的ELISA结果。

　　血浆样本‌：采血后30分钟内冰上分离血浆，优先选用EDTA作为抗凝剂，避免肝素抗凝，抗凝不全会因纤维蛋白原干扰产生假阳性。

　　尿液/脑脊液等样本‌：用无菌容器收集，4℃下2500rpm离心10分钟去除沉淀，样本需避免经血、阴道分泌物污染。

　　细胞上清/组织样本‌：细胞上清直接收集后离心去除细胞碎片;组织样本需液氮速冻，后续匀浆后离心取上清检测。

　　二、样本的规范保存条件

　　24-48小时内检测：可置于2-8℃环境暂存，避免长时间放置导致蛋白聚合加深本底。

　　1周内检测：分装后冻存于-20℃，避免反复冻融，反复冻融会造成蛋白降解，细胞上清类样本冻融1-2次后就可能无法用于检测。

　　长期保存：分装后置于-70℃环境，可稳定保存6个月以上，分装时按单次检测量分份，避免多次开盖污染样本。

　　三、关键注意事项

　　样本采集后需尽快处理，避免细菌污染，菌体自带的内源性HRP会引发假阳性结果。

　　冷冻样本复溶后需轻柔混匀，若出现沉淀需再次离心澄清后再检测，避免杂质干扰反应体系。

　　提前预估样本用量，准备2-3倍于单次检测的体积，预留重复样的余量，避免样本量不足导致实验中断。

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