人γ干扰素（IFN-γ）ELISA试剂盒使用说明书

　人γ干扰素（IFN-γ）ELISA试剂盒使用说明书

　人γ干扰素（IFN-γ）ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人γ干扰素的含量‌，其核心原理为双抗体夹心法，通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值）并计算浓度。

　实验原理

　试剂盒采用‌双抗体夹心法‌：预先包被抗人IFN-γ捕获抗体的微孔板，依次加入样本或标准品、HRP标记的检测抗体，形成“抗体~抗原~酶标抗体"复合物。经洗涤后加入TMB底物显色，颜色深浅与样本中IFN-γ浓度呈正相关，通过标准曲线计算结果。

　样本处理要求

　样本类型处理方法

　血清‌室温凝固10–20分钟，2000–3000 rpm离心20分钟，取上清；避免反复冻融

　血浆‌使用EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内2–8℃离心15分钟（1000×g），取上清

　组织匀浆‌用预冷PBS冲洗组织，按1:9重量体积比加入含蛋白酶抑制剂的PBS，冰上研磨后5000×g离心5–10分钟，取上清

　细胞上清‌1000×g离心20分钟，取上清检测，避免溶血

　注意：溶血样本会影响检测结果，不建议使用。

　试剂盒组成（96孔配置）

　名称配置保存条件

　微孔酶标板12孔×8条2–8℃密封保存

　标准品0.3 mL×6管（浓度：800、400、200、100、50、25 pg/mL）-20℃保存

　样本稀释液6 mL2–8℃保存

　检测抗体~HRP10 mL2–8℃避光

　20×洗涤缓冲液25 mL2–8℃保存

　底物A/B液各6 mL2–8℃避光

　终止液6 mL2–8℃保存

　封板膜&自封袋各2张/1个防潮保存

　操作步骤简要

　加样‌：设空白孔、标准孔、待测样品孔，每孔加样50μL。

　温育‌：37℃孵育30分钟，封板防止蒸发。

　洗涤‌：弃液后用洗涤液洗板5次，拍干。

　加酶‌：每孔加HRP标记抗体50μL（空白孔除外）。

　再次温育与洗涤‌：重复步骤2–3。

　显色‌：每孔加底物A、B液各50μL，37℃避光显色15分钟。

　终止‌：每孔加终止液50μL，立即测定。

　测定‌：以空白调零，450nm波长读取OD值，15分钟内完成。

　性能参数

　灵敏度‌：‌0.30 pg/mL‌

　标准曲线范围‌：‌7.81–500 pg/mL‌

　样本体积‌：‌50 μL‌

　板间变异系数‌：3.2%–6.0%

　板内变异系数‌：3.6%–4.4%

　平均回收率‌：‌0.92‌（92%）

　注：不同品牌试剂盒参数略有差异，实际数据以随货说明书为准。

　注意事项

　所有试剂使用前需平衡至室温（20–25℃）。

　洗板要净，防止残留影响OD值。

　显色液应无色或浅色，变蓝则失效。

　避免交叉污染，加样时更换枪头。

　注：本公司产品供科研实验，以上供参考！

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