ELISA法检测转录因子活性有哪些常见问题？

    ELISA法检测转录因子活性有哪些常见问题？

    ELISA法检测转录因子活性时，常见问题主要集中在样本处理、试剂操作和实验条件控制上。

    样本处理环节‌，核蛋白提取是关键。若提取不充分或蛋白降解，会导致信号弱或假阴性。需使用预冷的裂解液，并添加蛋白酶抑制剂，避免反复冻融样本‌。

    探针设计‌需针对转录因子的特定DNA结合位点，设计不当会显著降低结合效率，影响检测灵敏度。

    孵育条件‌需严格控制。温度不均或时间不足会导致反应不全，建议使用恒温孵育器，确保37℃±1℃孵育‌。同时，封板膜需密封良好，防止液体蒸发和污染‌。

    洗涤效果‌直接影响背景和信噪比。洗涤不净会增加背景，过度洗涤可能破坏结合。建议洗涤5-6次，每次静置30秒，确保每孔液体量≥300μL‌。

    此外，移液枪未校准、定期校准，加样体积不准会导致孔间差异。试剂保存不当（如反复冻融）也会影响活性，需按说明书分装保存‌。

    注意：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

    天津天正信达供应：RNA逆转录试剂盒、逆转录试剂盒、PCR试剂盒、提取试剂盒、色谱进样瓶、培养基瓶、试剂瓶、胎牛血清、染色液、试剂瓶、QPCR试剂盒、生物试剂、抗体、琼脂糖、实验耗材，开云在线登录拥有一支覆盖生物化学、分子生物学、免疫学等专业人员的研发、构建了仪器设备齐全的实验技术平台，主要包括AKTA、高压均质机、全波长酶标仪、高速落地离心机和qPCR仪等大型仪器设备。