ELISA实验中常见的错误有哪些?

　　ELISA实验中常见的错误有哪些?

　　ELISA实验中常见的错误及解决方案可归纳如下：

　　一、操作流程错误

　　孵育条件不当‌

　　温度波动(如频繁开关孵育箱导致温差>5℃)或时间不足(如设定30分钟仅孵育15分钟)‌。

　　酶标板未覆盖板膜导致液体蒸发，或叠放多块板子造成受热不均‌。

　　解决方案‌：使用恒温设备，严格遵循试剂盒建议的孵育时间和温度，单块板操作并密封孔板‌。

　　加样与洗涤问题‌

　　移液器未校准或操作不规范(如枪头插入样本液面过深)导致加样误差。

　　洗涤不净（残留洗涤液)或过度洗涤(浓缩洗液稀释错误)‌。

　　解决方案‌：校准移液器，采用多通道加样;洗涤时注满每孔并浸泡30秒，避免串孔‌。

　　二、试剂与样本问题

　　试剂失效或污染‌

　　标准品复溶不当(未离心或存在不溶物)、酶标记物失活(如HRP受叠氮钠污染)‌。

　　底物配制错误(如TMB母液过期)或终止液浓度不足‌。

　　解决方案‌：复溶标准品前离心，验证试剂活性;现配现用底物，避免金属器具接触‌。

　　样本处理不当‌

　　含防腐剂(如叠氮钠)或反复冻融导致蛋白降解‌。

　　溶血或细菌污染样本引发假阳性。

　　解决方案‌：使用新鲜样本，避免反复冻融;溶血样本需离心去除碎片‌。

　　三、设备与数据问题

　　仪器校准不足‌

　　酶标仪滤光片不匹配或未校准，导致读数偏差‌。

　　解决方案‌：定期校准仪器，确认波长设置与试剂要求一致‌。

　　标准曲线异常‌

　　标准品稀释错误或孔间污染，导致R²值低‌。

　　解决方案‌：反向稀释法配制标准品，更换移液器吸头避免交叉污染‌。

　　四、其他常见问题

　　高背景信号‌：封闭不充分或抗体浓度过高，需优化封闭剂(如5% BSA)并滴定抗体‌。

　　假阳性/假阴性‌：内源性干扰(如类风湿因子)或非特异性结合，建议设立质控对照‌。

　　通过规范操作、严格试剂管理和定期设备维护，可显著降低实验误差‌。

　　注意：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒

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