ELISA样本制备及注意事项

　　以下是ELISA样本制备的关键步骤及注意事项，综合实验规范与常见问题：

　　一、样本类型处理要点‌

　　血清制备‌

　　采集后室温静置1小时(凝血)，4℃ 2500rpm离心10分钟取上清

　　避免溶血(血红素干扰HRP显色)和细菌污染

　　血浆处理‌

　　使用EDTA抗凝管采集，30分钟内4℃离心分离

　　肝素抗凝剂可能干扰检测，需参照试剂盒要求选择

　　细胞培养上清‌

　　1500rpm离心10分钟去除细胞碎片，分装后-80℃保存

　　尿液/脑脊液‌

　　10000×g离心2分钟，去除沉淀物后检测

　　二、保存与冻存规范‌

　　样本类型‌ ‌短期保存‌ ‌长期保存‌ ‌禁忌‌

　　血清/血浆 2-8℃ 48小时 -80℃(6个月) 反复冻融>3次

　　细胞上清 4℃ 24小时 -80℃(分装) 室温放置>30分钟

　　三、关键注意事项‌

　　防污染措施‌

　　使用无菌离心管，操作全程在冰上进行(除凝血步骤)

　　细菌污染样本需离心后取上清重新检测

　　离心参数控制‌

　　血清/血浆：2500-3000rpm，10分钟

　　细胞裂解物：12000-13000rpm，5-10分钟

　　特殊样本处理‌

　　高脂血样本需超速离心(10000×g 15分钟)

　　四、常见问题解决方案‌

　　假阳性高‌：检查溶血/脂血情况，更换抗凝剂类型

　　重复性差‌：确保分装冻存，避免冻融循环

　　浓度异常‌：预实验确定样本稀释倍数(建议1:5-1:10)

　　通过规范操作可显著提升检测准确性。

　　注：以上资料仅供参考，不同品牌产品可能存在设计差异，操作前建议参考说明书‌。

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